产品目录

本制品是一种液态的低毒的血液保存试剂。它能立即稳定新鲜血液中的RNA，含有该试剂的健康人全血样品可在2～8℃保存5天，或在-20℃或-70℃条件下至少保存三个月；含有该试剂的哺乳动物血液样品可在15～25℃保存2天，2～8℃保存7天，或在-20℃或-70℃条件下至少保存六个月，RNA不会出现明显降解。

如需纯化保存于血液RNA稳定剂的血液样品，可选购血液总RNA高效提取试剂盒（货号：WH0047）并结合本说明书中的优化流程进行操作。提取的总RNA纯度高，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

• 有效保护：在保护新鲜血液中的RNA不被降解，或较少降解。
  
• 便捷使用：操作只需2步，适用于大量血液样本的集中保存。
  
• 完美兼容：后续配合我公司的硅基质膜柱法纯化试剂盒提取血液RNA或DNA，保证提取的得率和纯度。

分别将存储于本制品中的100μL新鲜小鼠血液于15～25℃、4～8℃、-20/70℃保存。应用我公司的血液RNA提取试剂盒（目录号：WH0049)提取RNA。以上为提取样本的总RNA电泳图。洗脱体积50μL，RNA上样量4～6μL，琼脂糖凝胶浓度为1%，6V/cm，电泳30min。
lane1～2：新鲜血液提取RNA
lane3～4：15～25℃保存两天后提取RNA
lane5～6：4～8℃保存一周后提取RNA
lane7～8：-20℃或-70℃保存半年后提取RNA

组分	规格
血液RNA稳定剂	100mL
悬浮液RSB	25mL
Proteinase K	2×1mL

保存：常温（18～25℃）




提取得率参考：
纯化保存于血液RNA稳定剂的血液样品时，使用血液总RNA高效提取试剂盒（货号：WH0047）并结合本说明书中的优化流程提取的RNA得率如下。

材料	RNA得率
健康人全血（300μL）	0.5～2μg*
大鼠全血（100μL）	2～6μg
小鼠全血（100μL）	4～8μg

注^*：健康人全血的RNA产量高度依赖于供体，单次产量可能有所变动。

预防RNase污染：

• 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
  
• 玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
  
• 配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。
  将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(V/V)，混匀后放置过夜，高压灭菌。

一、血液样品保存

• 使用前请确定血液RNA稳定剂储存于室温。取新鲜抗凝血液按1:3的比例加入血液RNA稳定剂（如取300μL健康人新鲜全血加入900μL血液RNA稳定剂或100μL哺乳动物新鲜血液加入300μL血液RNA稳定剂）。
  注意：保存血液样品时，请立即在新鲜抗凝血液中加入3倍体积的血液RNA稳定剂。如需处理更大量的血液样本，请选择合适规格的耗材进行操作。
  
• 立即盖上管盖，上下颠倒混匀8～10次。含有血液RNA稳定剂的人血液样品可在2～8℃保存5天，或在-20℃条件下至少保存三个月；含有血液RNA稳定剂的哺乳动物血液样品可在15～25℃保存2天，2～8℃保存7天，或在-20℃条件下至少保存六个月。
  注意：含有血液RNA稳定剂的血液样品必须在室温放置2h以上，以使血液样品充分裂解。该步骤可在低温保存样本前或完成保存之后进行。

二、血液样品中RNA纯化
如需纯化血液样品（保存于血液RNA稳定剂）中的RNA，请选购血液总RNA高效提取试剂盒（货号：WH0047）并按照以下流程进行操作。

• 纯化保存于血液RNA稳定剂的血液样品时，请先将样品室温放置或37℃水浴使其升至室温。然后6600rpm (~4000×g)离心10min，用移液器吸弃上清液，取沉淀进行以下操作。
  
• 向沉淀中加入1mL RNase-Free ddH2O，用移液器吹打使沉淀完全溶解。
  
• 6600rpm (~4000×g)离心10min。用移液器吸弃上清液。
  注意：请将上清去除彻底，否则会影响到RNA与CR4膜的结合。
  
• 缓慢加入240μL悬浮液RSB，用移液器反复吹打使沉淀溶解完全。
  注意：该步骤沉淀较难溶解，请吹打至沉淀完全溶解，否则会降低RNA得率。
  
• 向溶解后的样品中加入200μL RLH（使用前请加入β-巯基乙醇），然后加入20μL Proteinase K溶液，充分颠倒混匀，55℃孵育10min，其间颠倒混匀2～3次，溶液应变清亮。
  注意：请不要预先将裂解液RLH和Proteinase K溶液混合。如孵育后溶液未彻底变清亮，请延长孵育时间至溶液清亮为止。
  
• 将所有溶液转移至过滤柱CS中(过滤柱CS放在收集管中），12000rpm (~13400×g)离心2min，小心吸取收集管中的上清至新RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
  
• 加入0.5倍上清体积的无水乙醇(通常为220μL)，混匀(此时可能会出现沉淀)，将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR4中，12000rpm(~13400×g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR4放回收集管中。
  
• 向吸附柱CR4中加入350μL去蛋白液RW1H，12000rpm(~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR4放回收集管中。
  
• DNase I工作液的配制：取10μL DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70μL RDD溶液，轻柔混匀。
  DNase I储存液的配制：将DNase I干粉（1500U）溶解在550μL RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
  注意：解冻后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），避免反复冻融。
  
• 向吸附柱CR4中央加入80μL的DNase I工作液，室温放置15min。
  
• 向吸附柱CR4中加入350μL去蛋白液RW1H，12000rpm(~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR2放回收集管中。
  
• 向吸附柱CR2中加入500μL漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇），室温静置2min，12000rpm(~13400×g)离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR4放回收集管中。
  
• 重复步骤12。
  
• 12000rpm(~13400×g)离心2min，倒掉废液。将吸附柱CR4置于室温放置3min，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
  注意：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱CR4在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的RT等实验。
  
• 将吸附柱CR4转入一个新的RNase-Free离心管中，加入30～50μL RNase-Free ddH2O室温放置2min，12000rpm(~13400×g)离心2min，得到RNA溶液。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。

相关搜索：血液RNA保护剂，血液RNA稳定剂，全血RNA稳定剂，血液RNA保护剂，全血RNA保护剂，RNAguard Reagent